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蛋白酶K在具體實驗中的應(yīng)用點擊次數(shù)：1139 更新時間：2020-12-24
蛋白酶K經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定，還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因而它應(yīng)用很廣泛，包括制備脈沖電泳的染色體 DNA，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)(pH 4-12.5)均有活性。
蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)：20mg/ml蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)(proteinase K)：將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。
酶解與核酸結(jié)合的組蛋白，使 DNA游離在溶液中，隨后用不同方法進行 抽提，除去雜質(zhì)，收集DNA。EDTA等螯 合劑或SDS等去垢劑均不能使之失活。蛋 白酶K貯存液一般為10mg/ml或20mg/ml。 貯存于一20°C。蛋白酶K溶液為無色透明， 如出現(xiàn)沉淀就不能再使用。
蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以增加探針與靶核酸結(jié)合的機會，提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時，都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導(dǎo)致組織切片的脫落，細(xì)胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用，解決上述出現(xiàn)的問題，并能達(dá)到理想的染色效果。
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