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凋亡試劑盒的原理及現象分析點擊次數：1038 更新時間：2022-09-14
凋亡試劑盒通常應用于培養的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細胞狀態，才可以進行檢測。
一、凋亡試劑盒的細胞凋亡原理：
細胞凋亡普遍存在于生物界，既發生于生理狀態下，也發生于病理狀態下。細胞凋亡對胚胎發育及形態發生(morphogenesis)、組織內正常細胞群的穩定、機體的防御和免疫反應、疾病或中毒時引起的細胞損傷、老化、腫瘤的發生進展起著重要作用。
在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)位于細胞膜的內側，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。Annexin-V是一種分子量為35.8KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力特異性結合。將Annexin-V進行熒光素FITC標記，以標記了的Annexin-V作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。
二、凋亡試劑盒的細胞凋亡現象：
細胞發生凋亡時，由于胞漿和染色質濃縮、核碎裂，產生凋亡小體，使細胞的光散射性質發生變化。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期，前向和側向光散射的信號均降低。因此可通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀察細胞凋亡情況。
細胞凋亡過程的形態變化說明
細胞凋亡是個復雜的過程，我們在了解分析它的同時在記錄著它的細胞變化形態，由此我們將其變化的過程分為三個大的階段：
1.首先是是細胞體積縮小，胞漿凝縮，內質網變疏松并與胞膜融合，核糖體、線粒體等聚集，但結構無明顯改變，染色質逐漸凝聚成新月狀附在核膜周邊，嗜堿性增強，核固縮呈均一的致密物，進而斷裂，胞膜仍完整
2.其次就是胞膜不斷出芽、脫落，細胞變成數個大小不等的由膜包裹的凋亡小體(apoptotic bodies)。
3.凋亡小體被周圍具有吞噬功能的細胞如巨噬細胞、上皮細胞等吞噬、降解。在凋亡發生的全過程中，細胞膜一直保持完整，胞內容物不釋放出來，所以不引起周圍的炎癥反應。同一組織中，不同細胞發生凋亡的過程并不同步。
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